荣昌县某奶牛场牛奶中黄曲霉毒素M1的检测

何宗耀　唐臣学　唐刚　段彬　范才良

（重庆市荣昌县畜牧兽医局，重庆　荣昌　402460）

　黄曲霉毒素（aflatoxins）是由各种曲霉如黄曲霉和寄生曲霉产生的毒性代谢物。其中以黄曲霉毒素B1最常见，黄曲霉毒素B1通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。在实际生产中常常以检测黄曲毒素M1来判定牛奶被黄曲霉污染。当奶牛食用被黄曲霉毒素污染的饲料后，毒素随奶牛的粪便、尿液和奶排出体外。当人饮用被污染的牛奶后，会引起各种疾病如:肝细胞癌，瑞氏综合征和慢性肝炎等。文章使用ELISA方法对荣昌县远觉镇某奶牛场分5个时间段对鲜牛奶进行抽样检测，结果表明黄曲霉毒素M1阳性率极低。

1　前言

黄曲霉毒素M1是由各种曲霉如黄曲霉和寄生曲霉产生的毒性代谢物。目前已经从食品中分离出20多种黄曲霉毒素及其衍生物[2]。绝大多数危害不大,但是黄曲霉毒素M1是一种曲霉菌等菌类的高毒代物，具有强烈的致癌作用,抑制肝脏细胞中RNA的合成，破坏DNA的模板作用，阻止和影响蛋白质、脂肪、线粒体、酶等的合成与代谢，干扰动物的肝功能，导致突变、癌症及肝细胞坏死[1]。

当草料及粮食储备不当或者未及时晾干，温度处于12~42℃，水分含量18.5%时容易被黄曲霉污染，当奶牛饲喂被污染的饲料后，黄曲霉毒素B1经羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1，随着血液循环分泌牛奶中[6]。黄曲霉毒素M1结构稳定，在牛奶的加工过程中无法将它去除，人饮用了含有该毒素的奶会给人体造成极大伤害。因此对牛奶中黄曲霉毒素的检测显得尤为重要[3]。

目前世界上检测黄曲霉毒素M1的方法主要有：薄层层析法[7]，高效液相色谱法[8]，酶联免疫为基础的免疫分析法，底物传感器法。ELISA方法对黄曲霉毒素M1的测定具有特异性强、灵敏度高、分析时间短、成本低的优点[3]。本课题采用该方法检测荣昌县某奶牛场牛奶中黄曲霉毒素M1的含量，来了解荣昌县牛奶中黄曲霉毒素污染的情况，为有关部门做好奶牛绿色、健康养殖提供理论依据。

2　材料及方法

2.1　材料

2.1.1　确定受检样品：本次试验选取荣昌县远觉镇某奶牛场作为采样地点，首先对养殖场的生产情况(包括养殖数量、奶牛健康状况、饲养方式、所添加的精料品种)进行调查。奶农将每天采集的牛奶混合在一起为一个批次,分不同的季节连续5个批次对该奶牛场的鲜牛奶进行检测，每批次检测的样本数为2个，每个样品100　mL。

2.1.2　主要试剂盒：HELICA黄曲霉毒素M1竞争性ELISA检测试剂盒（美国Helica公司）生产批号：961AFLM01M-96。

2.1.3　主要设备：微孔板酶标仪（450　nm，上海科华实验系统有限公司，型号：KHBST-360），３100　mL量筒（塑料或是玻璃），样品提取用玻璃容器为过滤漏斗和烧瓶，TD4A离心机（型号：TDL-80-2B上海安亭科学仪器厂），振荡器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司，型号：MH-2），滤纸（Whatman　No.1），刻度移液管（100　μL、200　μL)，1　000　μL微量加样器。

2.2　样品前的处理、检测前的准备、检测程序均按照试剂盒说明书。

2.3　判定方法

样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1抗原的含量成负相关。计算的标准值绘成为一个对应黄曲霉毒素浓度的半对数坐标系统曲线图（已经在数据库中）,对照这个标准曲线，即可得出相应鲜牛奶黄曲霉毒素M1的含量(浓度ng/L)。按照黄曲霉毒素国标《GB　5413.37-2010食品安全国家标准规定》黄曲霉毒素M1浓度低于500　ng/L为阴性进行判定。往往实际生产中酶标仪的光度值直接输入系统,显示结果为定量定性的结果[养殖网:www.nczfJ.com/]。

3 试验结果

通过检测采集的10个样本，得出8个样本为阴性2个为阳性，阴性的检测率是80%。

4　分析讨论

4.1　通过对荣昌县奶牛场的鲜奶分5个批次的检测，　2013年3月10日这批奶黄曲霉毒素M1超标，经调查这与养殖户饲养方式有关，主要是由于养殖户资金有限,自配饲料中,出现原料质量不稳定造成的。建议：养殖户立即停配饲料，购买专业公司生产的专用奶牛饲料;禁止饲喂发霉的饲料和草料;对这批不合格的奶废弃处理。

4.2　黄曲霉毒素危害极大，无论对动物还是人类都能造成脏器损害，严重危害人和动物健康。它对肝脏有特殊亲和性和致癌作用，能够抑制肝脏细胞中RNA的合成，破坏DNA模板作用,阻止和影响蛋白质、脂肪、线粒体、酶等的合成与代谢，干扰动物的肝功能，导致突变、癌症及肝细胞坏死[10]。另外还危害动物的免疫系统造成免疫抑制。

4.3　随着人们生活水平的提高，畜产品的安全越来越被消费者重视。国家2010年重新修订黄曲霉M1检测标准，督促牛奶加工企业做好这方面的工作,保障奶及奶制品安全。

4.4　国家标准黄曲霉毒素浓度不得超过500　ng/L，但0～500　ng/L仍还有大量的黄曲霉毒素存在，随着时间在体内蓄积达到一定程度时也会对机体造成一定危害。作为养殖户不应忽视。有关部门要加强对动物饲料的监管，在养殖过程中和在流通环节中，对畜产品的监管尤为重要。

参考文献

[1]　马红岩，马　涛.浅谈黄曲霉毒素的危害.山西农业（致富科技），2007（06）：54-54.

[2]　张东升.黄曲霉毒素M1的危害、污染现状及检测进展.中国卫生检验杂志，2004（03）：266-269.

[3]　廖妍俨，黄家岭.酶联免疫法检测牛奶中黄曲霉毒素M1的应用.　贵州化工　,2012（04）:　33-34,39.

[4]　科娜.　2012年下半年宁波抽检玻璃瓶装鲜奶合格率仅14.81%.浙江在线新闻网站，2013，2.

[5]　李静.　蒙牛纯牛奶检出致癌物质黄曲霉毒素超标140%.新京报，2011，6.

[6]　朱辉.　黄曲霉毒素及其危害.　生物技术学报,品牌与标准化,2012(12):35.

[7]　窦玉平.　薄层层析法测定粮食中黄曲霉毒素B1，吉林农业，2011（01）：28.

[8]　丁平,　侯亚莉,　程晓伟.　高效液相色谱法测定饲料中黄曲霉素B1.饲料研究，2006（09）：61-63.

[9]　李长强　.　黄曲霉毒素产生的原因、危害及控制措施.　饲料博览,　2012（08）:53-54.

[10]　武栋梁.　浅析生活中的黄曲霉及黄曲霉毒素.　生物学教学　,2012(09):63.

[11]　余延国，姚兴海，张瑾.牛乳中黄曲霉毒素来源及检测方法研究进展.中国奶牛，2012（11）：37-39.

全球玉米供应充裕格局仍将延续

据美国农业部最新9月供需报告，美国玉米单产和总产预估值均为历史最高值。预计美国玉米年终库存量　仍将达到20.02亿蒲式耳，为2005/2006年度以来的最高水平。中国华北和东北主产区夏季持续干旱导致中国玉米产量预估值下调500万吨，阿根廷及黑海产区产量亦下调，但美国丰产抵消这些国家的减产，全球供应量增幅仍大于消费量增幅，最终年终库存量再次上调　210万吨，达到1.899亿吨，为2000/2001年度以来的最高水平。总体上，全球玉米供应充裕格局仍将延续。