规模化猪场和散养户猪瘟免疫效果的比较

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性或慢性、热性和高度接触传染的病毒性疾病,又称“猪霍乱”,是养猪业中常见的疾病,给养猪生产和发展带来了巨大的损失。本研究采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对永安市规模化养殖场和散养户的猪血清样品等进行检测,初步了解其猪瘟的抗体水平,比较二者之间的区别,并根据临床实践,分析造成差异的原因,为科学有效地防控猪瘟提供依据。下面具体来了解一下：规模化猪场与散养户猪瘟免疫效果的比较。并总结了猪瘟免疫效果的提高方法，以便为猪瘟控制提供依据。

1、资料与方法

一般资料。在2015年3月至2016年3月期间，选取黑龙江省齐齐哈尔市10个规模化猪场(598头猪)与68个散养户(266头猪)。其中规模化猪场中能繁母猪227头，保育猪129头，育肥猪86头，后备猪156头。散养户中能繁母猪76头，保育猪65头，育肥猪125头。对864头健康猪在28-30天之前进行猪瘟疫苗免疫，并采集864份血样，对其免疫效果进行对比分析。

方法。检测需要的试剂与仪器包括：ELISA检测试剂盒、离心机、加样器、隔水式普通培养箱、快速检测仪、微量振荡器等。将采集的血样经过无菌离心吸取血清制成样品，并对每份样品做好标记，放置在冰箱中冷藏处理。并从冰箱中取出试剂盒，放置在实验室中，确保温度恢复到室温(15　-26℃)，并对试剂进行观察，如果试剂中出现未溶解的固体物质，需要继续回温溶解。并放置在微量震荡器中维持0.5-1　min的震荡处理，并按照先后顺序摆好备用。并对阴性与阳性标准血清标记好加样位置，并对反应板符号做好标记。在反应板中加入50　uL血清稀释液，并依此加入阳性与阴性血清以及待检血清样品各50　uL，并对其进行震荡处理0.5-1　min，贴上封板膜，并放置在25℃隔水式普通培养箱中孵育1h。之后重复清洗，加入100　uL显色底物，重新孵育15　min，之后加入50　uL终止液，震荡30　s，对其OD值进行检测。

判断标准。样品PC低于40%表示为阴性；样品PC在40%及以上表示为阳性。其中样品PC计算为：（阴性对照血清OD　450　nm平均值样品OD　450　nm值）／（阴性对照血清OD　450　nm平均值　阳性对照血清OD　450　nm平均值）×100%。

2、结。。

规模化猪场中598头猪猪瘟抗体合格率为96.15%(575　j598)，其中能繁母猪合格218头、保育猪合格119头、育肥猪合格84头、后备猪合格154头；散养户266头猪的猪瘟抗体合格率为77.　44%　(206/266)，其中能繁母猪合格67头、保育猪合格49头、育肥猪合格90头。

3、讨论

在规模化猪场中，能繁母猪与后备猪的抗体水平较好，其主要是与规模化猪场重视种猪健康有着密切联系。根据结果显示，规模化猪场的猪瘟免疫效果明显优于散养户猪瘟免疫效果。散养户在养殖的时候，需要充分借鉴规模化猪场的养殖经验，要不断提高免疫技术，养殖户要重视猪瘟免疫，对免疫程序进行改进，并注意饮食健康，对猪圈的环境卫生进行改善，以便提高猪瘟的免疫效果，确保疫病发生率的降低，从而促进养殖户的经济效益显著提高，降低不必要的损失。

规模化猪场需要维持现有的防疫水平，确保猪瘟免疫效果维持良好的状态。而散养户需要根据自身的实际情况，在猪瘟免疫、科学饲养以及生猪采买的时候严格把控。需要对种猪的健康进行重视，以便切断感染源头。在购买种猪的时候，避免从疫区或刚治疗好猪瘟的猪场购买。在种猪运输的过程中，需要对运输工具进行彻底消毒，购买回猪场的时候，需要对随行人员与车辆进行彻底消毒，之后将猪送往猪场的隔离区。在隔离区饲养1个月所有的时间对其进行免疫接种后，待抗体检测合格方可进入生产区饲养。

猪瘟一直以来是威胁我县养猪业的头号疾病,对于猪瘟的控制目前主要还是依靠猪瘟疫苗的免疫预防,猪瘟疫苗免疫效果的好坏直接关系到全县猪瘟防疫的效果以及生猪感染压力的大小,也关系到我县畜牧养殖业的可持续健康发展。猪场及农村散养户定期对猪瘟疫苗效果检测评估是十分必要的。目前,用于猪瘟疫苗免疫效果评估的方法很多,如何选择一种切合我县实际的检测方法是科学评估的首要问题。我们采用两种常用的评估方法(免疫金标试纸检测和正向间接血凝试验)对全县农村散养户的336份血清样品进行了猪瘟免疫效果平行对比检测试验，这对于以后我县动物疫病预防控制中心能够及时准确掌握生猪猪瘟免疫效果，具有非常深远的指导意义。
1、材料与方法
1.1材料
1.1.1 被检样品采自全县12个乡镇农村散养户不同日龄的猪，其中仔猪(20～45日龄)96份, 生产母猪102份,肥猪(70～160日龄)138份。散养户提供的336份血清均为猪瘟免疫首免20日龄左右,二免在65日龄免疫后18～20天所采的仔猪全血样品。
1.1.2 猪瘟正向间接血凝试剂盒(包括猪瘟正向间接血凝抗原、猪瘟稀释液、猪瘟阴、阳性血清)购自中国农业科学院兰州兽医研究所,试剂盒批号:20080812 。
1.1.3 96孔血凝板(110。V型)，飞鸽牌台式离心机，精密移液器(5～50μl、20～200μl)，微量振荡器。
1.1.4 猪瘟抗体免疫金标试纸条，购自深圳市康百得生物科技有限公司，生产批号：20081020。
1.2 方法
将336份全血样品放入离心机离心，5分钟后吸取上层血清液，置于试管架上备用。在金标检测卡的椭圆形加样孔内加入2～3滴(50～100μ1)待检猪血清。将检测卡平放在平面上，在室温下静置8～15min判定结果。加样后8～15min可与金标试纸附带的参照卡的色带滴度进行参考比较，当被检样品检测线（T）条带的色泽大于参照卡中猪瘟抗体效价为1∶16 时，说明检测样品中猪瘟抗体的滴度较高，如果低于1∶16 则表示被检猪的猪瘟抗体水平过低，应及时进行猪瘟疫苗接种。正向间接血凝试验操作顺序如下:加稀释液→加被检血清→在血凝板上倍比稀释被检血清、阳性血清→加血凝抗原→震荡摇匀→37℃下静置1～2h→结果判定。以50%红血球出现凝集的血清最大稀释倍数为该血清的血凝效价。血凝效价达1∶16为免疫合格,1∶16 以下为免疫不合格。
2、 结果与分析

从上述表格可以得知：抗体金标检测仔猪猪瘟抗体效价达到保护线的为82%,正向间接血凝检测合格的为81%；育肥猪金标检测抗体水平达到有效保护值(1∶16)的为91%,正向间接血凝为91%；金标抗体检测生产母猪免疫合格的为84%,正向间接血凝为86%。
通过数据比较表明，免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合，试验结果可靠。
3 、讨论
3.1 从上述实验中可以看出，我县现有的疫病预防免疫程序中，总有一部分猪只免疫不合格，造成这种情况的因素可能与基层防疫员的技术、操作、疫苗用量、疫苗质量等有关。也可能是广泛存在的猪繁殖与呼吸障碍综合症、圆环病毒感染而破坏了猪的免疫系统，造成免疫抑制。
3.2 从操作方法上，免疫金标试纸条操作简便，更重要的是检测时间很短，使我们能及时做好疾病诊断、抗体监测。间接血凝是通过血球凝集程度来判断结果的，实验员的判断力不一样，就很有可能出现不同的结果，即便对于同一操作者，每次的试验判断结果都可能有一定的偏差。
3.3 从经济成本上，免疫金标试纸检测也能体现出一定的优势，它能大量成批的检测，也能单独进行检测，且不造成浪费。而间接血凝所需抗原一经开启就必须一次用完，若检测量较小的情况下，就会造成很大的浪费。
4、 结论
综上所述，猪瘟抗体金标试纸检测法，凭借其操作简便，不需要技术含量很高的实验员，结果直观，反应时间短的优势，非常符合我县的实际需要。乡镇兽医站，养殖场都可推广应用，对我县应对重大动物疫病时的应急反应能力，将起到举足轻重的作用。