兔球虫病诊断方法 兔球虫病防控的研究进展

兔球虫病是一种常见的寄生虫病，目前尚未研制出兔球虫疫苗，国内外防治兔球虫病的主要方法仍然是应用抗球虫药。南于兔球虫对各种化学性抗虫药很容易产生抗药性，且不同地区球虫株之间存在差异，患兔生长发育受阻，体重可减轻12％～29％，死亡率高达80％以上，造成经济损失大。下面具体来了解一下：兔球虫病诊断方法 兔球虫病防控的研究进展。
 

1、常规诊断

实验室诊断一般根据季节因素、环境、年龄、临床症状和病理剖检后的典型病变可进行初步诊断。确诊需进行实验室检查，常用饱和食盐水浮集法和直接抹片法对粪便进行检查，值得注意的是，当患急性兔球虫病时，粪便检查往往会看不到卵囊，则必须进行病例剖解。可取肝脏和小肠坏死灶，进行镜检，观察是否有椭圆形卵囊或透明的呈香蕉型的裂殖子，如发现即可确诊为球虫病。如果要确诊感染球虫的种类，还需对球虫卵囊的寄生部位、孢子化时间、孢子化卵囊的大小、形态结构以及潜隐和致病性等特征进行研究，有时还需进行人工感染动物实验来确诊。在11种公认的兔球虫中，只有斯氏艾美耳球虫寄生在肝脏，具有高致病性，潜伏期为14天；黄艾美耳球虫和梨形艾美耳球虫寄生在大肠，其中黄艾美耳球虫寄生在盲肠近端和结肠，属于高致病性，梨形艾美耳球虫寄生在结肠，属于中度致病性，这两种球虫潜伏期均为9天；剩下八种分别寄生在小肠的结肠段、空肠、回肠、十二指肠以及肠道相关淋巴组织处，只有肠艾美耳球虫具有高致病性，潜伏期4.5-10天不等。

2、分子生物学诊断

Fernandez等人通过一组序列特征扩增区域标记技术作为艾美耳球虫属的特异性鉴定。Carvalho等人用20个卵囊就能准确的鉴定7种主要感染的艾美尔球。PCR作为常规的诊断技术可以有效的检测畜禽中艾美耳球虫的波动，对预防寄生虫方面减少了不必要的工作。Myung-JoYou采用多重PCR扩增ITS1序列，对柔嫩艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫进行诊断，仅Spg的DNA进行多重PCR就可以对艾美耳球虫属的球虫进行检测，因此多重ITS-PCR方法敏感度较高，只需要很少量的DNA样本即可。Yan等人对6种兔艾美耳球虫ITS进行扩增，并且应用多重PCR诊断方法，区分了三种高致病性艾美耳球虫。Oliveira等设计出11种兔艾美耳球虫的ITS1序列特异性引物，采用套式PCR方法，仅用500fg到1pg即能扩增出特性行条带[7]。Khaled等人采用ITSl　PCR扩增对兔艾美耳球虫感染进行早期诊断，结果显示，在感染球虫第15天，肝脏显示不规则黄白色病变，肠道上皮组织病理切片可以看见不同的裂殖体和配子体；第20-24天出现肝肿大和肝腹水病变；在感染的第12天肝组织PCR呈阳性，粪便样品是第18天呈阳性，血液样品呈阴性。PCR可以用来作为艾美耳球虫病的早期诊断方法，也可以在粪便卵囊脱落前检测到裂殖体。

分子生物学鉴定是一种准确、有效的早期诊断球虫病的方法。普通PCR方法可以有效鉴定7种主要球虫，并且只需要20个卵囊即可，而且操作简单、成本低，但是需要纯化才能测序，易出现假阳性。套式PCR单个卵囊即可检出，该方法敏感性好、特异性高，可以有效检测兔球虫的感染情况，但套式PCR方法费时，而且也易出现假阳性。而且PCR方法还可以作为兔球虫早期诊断的方法，可以在球虫对兔肝脏造成影响前做出有效诊断。很多病原检测采用到环介导等温扩增(LAMP)方法，LAMP方法特异性强、等温条件下灵敏度高、操作简单、易检测等特点，Christopher等采用LAMP方法对鸡球虫感染进行特异性检测，兔球虫未见用相关LAMP检查方法，但可以借鉴鸡球虫相关报道。

3、展望

兔球虫病对养兔业危害严重，关于球虫方面的研究也从未停止过。球虫感染多为混合感染，不同的艾美耳球虫潜伏期和感染部位不同，其危害也不相同。准确的诊断患病动物感染哪种球虫病，最好可以在未对动物造成严重伤害前做出早期诊断，可以更有效的控制球虫病。迄今为止，对球虫的防控研究主要还是集中在药物方面，

但是球虫极易对药物产生耐药性，也会有药物残留问题。因此对球虫病早期分子生物学诊断的相关研究应该加强、深入，可以为兔球虫病的防控提供高效的方法，从而更好的控制球虫病。

兔球虫病临床症状
根据球虫的寄生部位可分为肠型、肝型和混合型三种。开始时病兔食欲减退，精神沉郁，伏卧不动，生长停滞。眼鼻分泌物增多，体温升高，腹部胀大，臌气，下痢，肛门沾污，排粪频繁。肠球虫有顽固性下痢，甚至拉血痢，或便秘与腹泻交替发生。肝球虫病则肝脏肿大，肿区触诊疼痛，黏膜黄染。家兔球虫病的后期往往出现神经症状，四肢痉挛、麻痹，因极度衰竭而死亡。肠型死亡快，肝型较慢。
病理变化
肠型球虫病见十二指肠壁厚，内腔扩张，黏膜炎症。小肠内充满气体和大量微红色黏液，肠黏膜充血并有出血点。慢性者，肠黏膜呈灰色，有许多小而硬的白色小结节，内含有卵囊。肝球虫病则肝肿大，肝表面与实质内有白色或淡黄色的结节性病灶，取结节压碎镜检，可见到各个发育阶段的球虫。日久的病灶，其内容物变为粉粒样钙化物。剖检所见多数为肠球虫和肝球虫混合感染。
剖检
1、肠球虫急性死亡，肠壁血管出血、充血、十二指肠扩张、肥厚、粘膜、发炎、肿胀、充血、出血，小肠充气，内积红色粘液。慢性兔肠粘膜呈淡灰色，并有许多小而硬的白色结节和小的化脓性坏死病灶，肠系膜淋巴结肿大，膀胱积有黄色浑浊性尿液。膀胱粘膜脱落。
2、肝球虫，可见肝肿大，表面有数量不等和大小不一的白色或淡黄色结节，呈圆形，如栗粒，大至豌豆，沿小胆管分布。慢性者胆管周围和肝小叶间的结缔组织增生，使肝细胞萎缩，肝脏体积缩小，肝硬化。胆囊粘膜发炎充满浓稠色淡的胆汁，腹腔积液等。
3、肝、肠混合感染，其两种病变都有，并且显现轻、重或多、少之分，无疑给诊断带来困难，同时易混淆或误诊，实践证明，球虫病最易与大肠杆菌、魏氏梭菌、肝片吸虫、拴尾蚴虫等混合感染，尤以大肠杆菌为甚，因此，应做好类症鉴别，依症辨别，综合分析，对症论病，最后确诊，再采取有效措施预防和治疗。
诊断
1、根据流行病学、临床症状和病理变化可做出初步诊断，确诊需进一步做实验室诊断。
2、 实验室诊断
镜检卵囊可采取肠黏膜的白色小结节、肝脏的白色结节压片检查，或取粪便直接涂片检查，必要时采取粪便用饱和盐水漂浮法检查卵囊。
给药方式
目前球虫药的使用方式分为【注射】，【混饮】，【混粮】，【直接口服】以及【含有球虫药的兔饲料】，这五种最常见的形式。
一，注射方式
给药方式：皮下注射，通过将【针剂球虫药】注射到皮下后缓慢吸收而达到预防的效果。
优点：给药剂量准确，摄入量有保证，效果确切。
缺点：需要注射比较麻烦，兔子有疼痛感。
二，直接口服方式
给药方式：经口喂服，通过将【可直接口服的水剂球虫药】直接喂到兔子口中吞咽吸收而达到预防的效果。
优点：给药剂量准确，摄入量有保证，效果确切。
缺点：需要喂药比较麻烦，导致兔子生气，或喂药者被咬，或兔子喂药时受伤。
三，混饮方式
给药方式：将【水剂球虫药】按照一定比例与饮水混合后【让兔子自由饮用】而达到预防的效果。
优点：不需要打针，不需要专门喂药，省事。
缺点：很多兔子饮水量偏小导致药物摄入不足，或饮水中加了球虫药有异味兔子不喝，最终导致预防球虫病失败。
四，混粮方式
给药方式：将【粉剂球虫药】按照一定比例与兔粮混合后【让兔子自由食用】而达到预防的效果。
优点：不需要打针，不需要专门喂药，省事。
缺点：药粉附着性差，很难与兔饲料充分混合并全部附着于兔饲料表面，并且很多幼兔吃食不规律，或兔饲料中加了球虫药有异味兔子不爱吃导致药物摄入不足，最终导致预防球虫病失败。
五，喂含有球虫药的兔饲料
给药方式：兔饲料生产者将球虫药预置于兔粮中，兔子通过吃食间接摄入球虫药而达到预防的效果。
优点：不需要打针，不需要专门喂药，省事。
缺点：兔饲料适口性如果不好，就会导致药物摄入不足，最终导致预防球虫病失败。
六，需要重视球虫药带来的肠道刺激
症状：有一些兔子使用球虫药后，粪便发生异常，例如大小不一，甚至出现水样便。
解决：每天喂服益生菌类药物来维持兔子肠道菌群正常状态，例如乳酶生片。
七，必须重视过量使用球虫药导致的中毒。
症状：一些人擅自加大球虫药的使用量导致兔子球虫药中毒。
解决：严格按照产品说明书所标示的使用方法，使用剂量来使用。一旦发生药物中毒，只能用过加快体内代谢的方式解毒，例如喂大量的饮水，或输液（每公斤体重10毫升），并辅以常规解毒方式，例如注射维生素C，注射强力解毒敏。
防治
加强兔场管理，成年兔和小兔分开饲养，断乳后的幼兔要立即分群，单独饲养。保证饲料新鲜及清洁卫生，饲料应避免粪便污染，每天清扫兔笼及运动场上的粪便，定期消毒。
可采用莫能霉素等药物预防本病发生。发现病兔立即隔离治疗。治疗药物可用磺胺甲氧嘧啶、呋喃唑酮等。
发现病兔应按《中华人民共和国动物防疫法》规定，采取严格控制、扑灭措施，防止扩散。病兔应隔离、治疗或扑杀，病死兔的尸体、内脏等应深埋或焚烧。兔笼、用具等应严格消毒，兔粪堆积发酵。消灭兔场内的鼠类、蝇类及其他昆虫。
1、兔舍建筑应选择向阳、干燥的地方，并要保持环境的清洁卫生。
2、食具要勤清洗消毒，兔笼尤其是笼底板要定期用火焰消毒，以杀死卵囊。
3、断奶以后至3月龄的兔应用药物控制球虫病的发生，且不分季节。为防止产生抗药性，可采用几种抗球虫药物轮换使用。
常用预防球虫病的药物及用法：
兔球速杀广谱类粉剂抗球虫药，以每百公斤饲料混药100克饲喂。
氯羟吡啶以每百公斤饲料混药20克-25克饲喂。（效果不明显）
氯苯胍每日每公斤体重15毫克拌料。（一般会产生耐药性）
上述药物也可用于治疗，一般用预防剂量的2-3倍，毒性强的药物除外。不完全喂料时应在料中增加用药量。在众多抗球虫药中，含有马杜霉素的各种剂型的药，不能用于兔，否则会发生中毒死亡。