兔链球菌病的诊断

赵宏伟 李晓福（辽宁省昌图县八面城动物卫生监督所 112512）

兔链球菌病是一种由溶血性链球菌引起的以仔兔急性败血症或下痢为特征的传染病。兔链球菌病主要是一种直径0.5~l.0微米的球菌，呈链状排列，链的长短因活体或体外培养而有不同。培养时，对营养要求较高，普通培养基上生长不良，需在培养基中加入血清、血浆、腹水、葡萄糖等才能良好生长。

1 流行病学

本病一年四季均可发生，带菌动物及病兔是主要传染源。病原菌随分泌物和排泄物污染饲料、饮水、空气、笼具等经健康兔上呼吸道黏膜或扁桃体而感染。当饲养管理不当、受凉感冒、长途运输等因素导致兔机体抵抗力降低时，可诱发本病。天气变化也是诱发本病的重要因素。春、秋两季较为多见，主要危害幼兔。

2 临床症状

发病兔表现为食欲减退，精神沉郁，体温升高，呼吸困难，有浆液性鼻汁，有时腹泻，有的病例不显临床症状而急性死亡。

3 病理学诊断

皮下组织呈出血性浆液性浸润，脾脏肿胀，出血性肠炎，肝脏和肾脏脂肪变性。肺脏暗红或灰白色，伴有胸膜肺炎、心内膜炎。

4 病原学诊断

病料采集。有病变的组织、化脓灶、鼻咽内容物、肠道内容物等作为被检材料。

显微镜镜检。取病兔血液、肝、脾等组织涂片，（www.nczfj.com）进行革兰氏染色镜检，若发现革兰氏阳性的球菌，呈链条状排列，可做出初步诊断。

细菌分离培养。取病变组织或炎性渗出物以划线法接种血液平板，37℃培养24小时，观察菌落形态及溶血情况。链球菌在血液琼脂培养基上发育良好，37℃培养一天，形成露滴样、圆形、凸起、灰白色菌落，β溶血，培养时间延长，则菌落呈扁平状。在0.1%美蓝牛乳，6.5%氯化钠肉汤，pH值9.6肉汤，40%胆汁琼脂等培养基上不发育。不分解马尿酸钠，淀粉。水解精氨酸产生氨气。不发酵菊糖和海藻糖。分解蔗糖，产酸不产气。

细菌鉴定。荚膜染色（印度墨汁法）：取一接种环培养物于载玻片一端，另取一接种环2%福尔马林印度墨汁，与菌液混合，推成薄片，自然干燥，火焰固定，再滴加革兰氏染色液中的石炭酸复红染色液，染色30秒，吸去多余液体，待干燥后，油镜观察。背景呈黑色，菌体染成红色，其周围有一较宽的无色透明环，即荚膜染色阳性反应。溶血性试验：通常采用平板法。将细菌接种在血液琼脂平板上，观察溶血环的产生、颜色、大小等。链球菌为β溶血。链激酶试验：首先配制草酸钾人血浆。草酸钾0.01克放入灭菌小试管中，再加入5毫升人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。试验方法为吸取草酸钾血浆0.2毫升，加0.8毫升灭菌生理盐水，混匀，再加入37℃培养24小时的细菌培养基0.5毫升及0.25%氯化钙0.25毫升，振荡摇匀，置于37℃水浴10分钟，血浆混合物自行凝固，然后观察凝块重新溶解的时间，完全溶解为阳性，如24小时后不溶解即为阴性。血清学分群试验：将分离的细菌用热酸等提取法提取群特性（C）抗原，再与特异性抗血清作沉淀反应，在界面处有白色沉淀物者，表示为阳性结果。

动物接种试验可以采用小鼠或豚鼠进行，但小鼠最敏感。将病料作成悬浮液或用培养物进行皮下、静脉或腹腔接种，接种动物常于18~72小时呈败血症死亡，然后回收细菌培养，其实质脏器有大量细菌生长。对于小鼠试验，皮下或腹腔注射被检菌株的血清肉汤培养物0.2毫升，一般接种鼠于24~72小时死亡。死亡鼠脾脏肿大，有小出血点。肝脏肿大，有粟粒大散在性坏死灶。肾肿大，有出血点和淤血斑，间有小化脓灶。肠道黏膜充血、出血。淋巴结肿大、出血。肺卡他性炎症，气管黏膜有出血点。心外膜有出血点。对于豚鼠试验，用上述培养物0.5毫升皮下或腹腔注射，一般于48~72小时死亡，病变与小鼠相似。

5 血清学诊断

免疫扩散试验。取琼脂糖1克，加入Tris缓冲液（pH值8.6）100毫升，0.1%甲基橙10毫升，煮沸后加入0.01%硫柳汞，制成2~3毫米厚平板。按六角形模型打孔，孔距为4毫米。周围孔径为4毫米，加阳性血清和被检血清；中间孔径为5毫米，加抗原。置室温24~48小时判定结果。凡抗原孔与被检血清孔之间形成一条致密沉淀线及其末端向毗邻的被检血清孔之抗原孔方向偏弯者均判为阳性。