鲜牛乳体细胞数有哪些检测方法？

牛乳体细胞数量是衡量奶牛生理健康状况的重要指标,高体细胞数直接指证奶牛的乳腺患有炎症性疾病。患炎症奶牛所产的牛乳不仅营养成分含量偏低,而且人们误饮后甚至会引发群体性食物中毒,直接威胁饮用者的安全和健康。对牛乳体细胞数进行检测,可以及时发现有炎症的奶牛,进而从源头上保障牛乳的品质。介绍了关于牛乳体细胞数的主要检测方法,并对这些方法的特点进行了分类汇总,进而对这些方法的发展和应用进行了总结和展望。鲜牛乳体细胞数有哪些检测方法？下面具体来介绍一下：

1、体细胞的来源及正常指标

奶牛乳腺正常时，分泌鲜乳内的体细胞主要为巨噬细胞，但当乳腺发生炎症时，分泌鲜乳内的体细胞主要为白细胞，是一种免疫细胞，是由于机体与病原相互斗争产生的物质。当奶牛乳腺组织发生感染后，90%以上都为嗜中性粒细胞。在细菌侵入到乳腺组织并开始大量繁殖时，就会导致多核白细胞等免疫细胞逐渐接近感染部位，并侵入乳腺泡将病原微生物吞噬。另外，发生炎症反应时，巨噬细胞会大量增殖，并产生一些化学介质，促使炎症反应进一步加重，造成组织毛细血管的通透性明显增强，促使血浆白蛋白、免疫球蛋白以及其他多种白细胞侵入乳腺泡腔内，形成白细胞用于吞噬细菌。

牛乳中体细胞数(　SCC)主要用于判断奶牛乳腺健康与否。例如，当牛乳中SCC有所增加，但乳房组织没有出现明显症状，即可判断患有亚临床型乳房炎。另外，牛乳中的SCC还能够用来表明发生炎症反应的轻重程度。通常来说，奶牛没有发生乳房炎分娩的乳汁中，每毫升的牛乳SCC在20万个以下，而如果发生临床型乳房炎或者亚临床型乳房炎时，每毫升牛乳SCC可超过50万个。

2、常用检测方法

显微镜细胞计数法。人工显微镜计数法是一种直接检测法，是指鲜牛乳样品直接滴加在载玻片上使用显微镜观察，并由人工计算所含的体细胞。鲜牛乳采取该法检测体细胞的步骤是：先配置染色液，即取40　mL四氯乙烷和54　mL乙醇，充分摇晃均匀，然后放在65℃的温水溶液中进行3　min加热，再添加0.6　g甲基兰，混合均匀后置于4℃冰箱，在温度达到4℃时再添加6　mL冰醋酸，放在常温条件下保存；取一片干净的载玻片，划分成4个小方格，每格面积为1　cm2，然后用微量注射器吸取10　μL生鲜牛乳样品注射到1　cm2的载玻片上，平放在恒温箱中，干燥后浸在染色液，最后形成均匀玻片；放在300～500倍显微镜下对玻片上的染色细胞进行观察，按照一定的准则计算体细胞数量。一般按照“数上不数下，数左不数右”的计数规则进行计数，防止出现遗漏和重复。尽管该法使用设备简单，容易在实验室外操作，但整个操作过于繁琐，具有较大的工作量，特别是在计数时容易出错。在人工显微镜计数法的基础上，通过改进发明荧光显微镜计数法，即使用特殊的缓冲液或染液对鲜牛乳样品进行处理，再使用安装相应滤色镜的荧光显微镜进行计数。一般来说，鲜牛乳中的蛋白质不会形成荧光，不会影响测定，脂肪球会形成黄绿色的荧光，使用相应的滤色镜能够挡住，只有体细胞形成的红色荧光能够看见，从而能够更好地使荧光细胞同周围背景进行区别，能够有效提高计数的准确率。

加利福尼亚细胞数测定法（CMT法），是一种间接检测法，其原理是鲜牛乳中的体细胞接触表面活性试剂，如溴甲酚红紫、烷基芒硫酸盐、烷基芳基磺酸或者氢氧化钠等，能够使细胞收缩凝固，同时释放脱氧核糖核酸，并发生凝聚，含有越多的体细胞，凝聚状态则会越强，形成越多的凝聚块，对这些凝聚块统计就能够估算体细胞的数量。该法所需设备少，操作简单，检测速度快，灵敏度高，价格便宜，结果比较准确，且同直接镜检细胞计数法、过氧化氢酶活性等也具有较好的关联性，且受环境温度影响较小，样品中即使混杂有毛发等外源物质也不会对结果产生影响，适合对个体奶牛或者总奶样进行检验；缺点是只能够得到体细胞的相对数量，比较容易受到人为因素影响，必须经过专门培训的人员才能够进行该项检查。另外，该法有时会出现假阳性结果，如鲜牛乳不新鲜或者泌乳末期的乳汁等，最好是检测泌乳量中期的牛乳。牛乳感染细菌后能够产生的毒素，导致体细胞被破坏，会使临床乳腺炎阳性的牛乳呈阴性。

pH值检测法。该法是一种间接检测法，由于奶牛乳房发炎后所分泌的乳汁pH值同体细胞间存在一定的关联性，从而可经由测定牛乳样品的pH值来判断所含体细胞的数量。检测时，先用一次性培养皿取2　mL左右的鲜牛乳样品，并滴加相同剂量的诊断液，按照同心圆方式对培养皿进行摇动，在30～60　s之间就能够判断结果。当测地的牛乳pH值处于6.　4～6.6之间，判断每毫升的牛乳中含有0～20万个体细胞；pH值处于6.6～6.8之间，判断每毫升含有20万～50万个体细胞；pH值位于6.8～7.0之间，判断每毫升含有50万～150万个体细胞；pH值位于7．O～7.2之间，判断每毫升含有150万～500万个体细胞；pH值超过7.2，判断每毫升含有500万个以上的体细胞。该法操作简单，但是检测结果有时不太准确，还需要配合进行显微镜检测才能获得比较准确的结论。

检测体细胞数有哪些方法？
前获得世界各国普遍承认和使用的体细胞计数方法概括起来主要分为显微镜人工计数法和自动计数仪计数法。
1、显微人工计数：体细胞计数的国际标准方法为显微镜镜检法，此法准确，大部分的快速检测方法均用此法作校准，但在制备样品、计数镜检时费时、费力，不适合作为现场快速和大样品量时使用。
2、自动计数仪计数：目前，在乳品生产中牛乳体细胞计数主要是依靠大型的体细胞仪完成的，体细胞自动计数分析研究主要有以下两个方面:
（1）流式细胞分析法.具代表性的产品为美国Bently计数仪，福斯Fossomatic 5000，荷兰Delta体细胞计数仪等。该法检测速度快，适合乳品集中检测，但仪器成本高，不能够保留样本，且需要熟练人工操作，经常性校正监测等。
（2）另一方面是利用数字图像分析系统，典型产品如韩国C-reader ADAM体细胞计数仪，该法数据准确，排除人为因素影响。由于该方法是基于标准镜检法的一种方法，所以其在韩国已经使用该种方法代替标准法对大型自动仪器进行校正。华诚睿光的牛博士Ⅱ和牛博士Ⅲ就是这种检测方法的典型代表。