奶牛场的环境测定及其敏感抗生素的筛选

赵达卓1，孙福亮2

(1.吉林省延边州动物疫病预防控制中心　133000；2．延边大学农学院动物医学系　13300)

摘要：目前多数养殖场环境的处理不够恰当，各种药物的滥用已经使许多菌类、病毒产生了耐药性，引起各种传染病的发生和治疗难以控制，为防疫工作带来了一定的不便。通过对延边州某奶牛场进行了场内环境测定及其敏感抗生素的筛选，为养殖户提供一些科学、合理的养殖用药方案。

随着养牛业的快速发展，牛场周围的环境与环境污染的问题也日益突出。为保障人畜安全，防止环境污染，中小型集约化养殖场环境参数及环境管理的标准，根据国情规定牛场和牛舍环境卫生标准及环境管理要求，可作为已建牛场进行环境评价、改善环境管理措施及新建牛场规划设计的依据口]。

奶牛场如管理不善，会诱发常见疾病，如口蹄疫、炭疽及奶牛乳房发生炎症等，其前俩种病传播很快，甚至感染到人群。炭疽是由炭疽杆菌引起的一种急性、热败血性传染病，死亡率极高；口蹄疫是偶蹄兽的一种急性、发热性高度接触性传染病，期临床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱性疹。在牛场生产中应坚持“防病终于治病”的方针，防止和消灭奶牛疾病，使奶牛更好地发挥生产性能，延长使用年限，提高养牛的经济效益。

本试验对延边某奶牛场进行了环境测定和敏感抗生素的筛选，以研究哪些抗生素对本试验场能够产生有效效果，给养殖户以后的用药提供一些合理指导，保持养殖场以后良好的环境。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1样品采集

本次试验对延边州某奶牛养殖场的牛舍内和饮用水中的微生物的采集。

1.1.2试验试剂与器材

标准培养基，药敏纸片，血液琼脂平板培养基，移液器，生理盐水等。

1.2　方法

1.2.1样品采集及方法

在舍内角落、中心、窗口、门后等地放置10个打开盖子的培养基采集。放置2～3min盖上平皿盖回收，采集同时记录舍内外相对温度和湿度；用无菌注射器取1mL饮用水密封与培养皿带回实验室检测。

1.2.2　检测方法及判定标准

活细胞计数法：常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，做一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。

结果判定的方法：设计算出的舍内总细菌数为n，水中微生物菌落数量为m。当n≥2时为不合格，当n≤2时为合格。当m≥100时为不合格，当m≤100时为合格。

1.2.3试验步骤

将采集回来的样品进行培养；将培养物做成悬菌液，分装保存；把悬菌液稀释后用移液器吸取2μL稀释液在血液琼脂培养基进行涂板，培养；根据培养出的菌落数计算总活菌数。取11个血液琼脂培养基，在每个培养基上用移液管吸取2　μL的稀释菌悬液进行涂板，在涂完板培养基上放置4个的抗生素试纸片培养后观察抑菌环。

1.2.4药敏性试验判定标准

药物敏感性判定标准参照美国临床实验室标准化委员会(National　Committee　for　Clinical　Labora-tory　Standards，NCCLS)颁布的《抗微生物药物敏感性试验执行标准第16版信息增刊》标准。

2.　结果

经过试验得出舍内细菌总数和水中微生物总数其结果及标准见表1。

表5中可以看到环丙沙星、优立新、洛美沙星、米诺环素的抑菌圈大小分别为20mm、8mm、18mm、16mm，其他几种抗生素没有产生抑菌圈[养殖网:www.nczfJ.com/]。

3　讨论

从表2可知，舍内总细菌数为6.　8642万个／m3，饮用水中的微生物量为418cuf／mL，与国家标准参考值2万个／m3和1OOcuf／mL对比表明该奶牛场圈舍内的细菌和饮用水中的微生物都严重超标。水是任何动物每天都不可缺少的营养物质，所以一定不要让养殖场的水源受到污染，而实验结果该奶牛场的水源已经受到了污染，主要的原因可能是牛场内的废水处理不够妥善，废水的排放点可能距离饮用水源有些近，导致了饮用水的污染，应该及时的找到原因并改进。

从表3、4、5、6可以看出只有万古霉素、强力霉素、氟哌酸、呋喃妥因、利福平、头孢曲松，环丙沙星、优立新、洛美沙星、米诺环素产生了抑菌圈，通过产生的抑菌圈直径与表1中的抑菌圈直径解释标准对比可以看到只有万古霉素、氟哌酸、环丙沙星、米诺环素的抑菌圈没有在耐药直径范围内，其他几种抗生素的抑菌圈均在耐药的直径范围内；有学者曾对牛场内的无乳链球菌进行过药敏试验和耐药性测定，测定后结果表明对该菌种有较强抑菌作用的抗生素有卡那霉素、四环素、强力霉素、多黏菌素B、环丙沙星、氟哌酸等，说明本实验的结果万古霉素、氟哌酸、环丙沙星、米诺环素对该牛舍内的细菌微生物有较好的的敏感性是比较准确的。