牛结核病的诊断方法

隗金玲

（黑龙江省宾县畜牧兽医局，黑龙江哈尔滨150400）

1　临床诊断

结核病畜多数不呈现明显症状，对于这种隐性的结核病是不易诊断的，在结核病的防治中占有特别重要的位置，所以必须仔细地进行流行病学调查和临床观察。体表淋巴结剧烈肿大时，则可能为全身性结核；乳房淋巴结肿大或乳房后两个乳腺区发生境界不明的无痛无热的硬结，表面凹凸不平或乳头萎缩，可能感染乳房结核；胸部叩诊呈现实音或半实音，并有杂音、摩擦音，以及直肠检查发现体壁腹膜有密发的珍珠样结节时，可能是感染浆膜结核；阴道流出混浊的黏液，其中混有白色或黄色浮游物甚至血丝，常配不孕，发情不正常，流产以及输卵管变硬时，可能是感染生殖器官的结核；如果发生消化障碍，习惯性腹痛，慢性腹泻与便秘交替或粪便稀薄，混有黏液、脓汁或血汁，以及直肠检查触知肠系膜淋巴结肿大时，可能是感染肠结核。

2.　细菌学诊断

对确定开放性结核病特别重要。对可疑为开放性肺结核进行细菌学诊断时，可用棉拭子采取气管黏液或用病牛喷出的干痰块涂片作抗酸性染色进行细菌检查，必要时制成乳剂进行动物接种试验。病畜常吞咽从肺内咳出的痰汁，细菌即可经过胃肠随着粪便而排出体外。因此通过粪便也可以检出开放性结核病畜。①硫酸法：在痰液内加2倍量的6%的硫酸溶液后远心沉淀20min，用3%的苛性钠溶液1～2滴将沉淀物中和。②安替佛尼法：病料内加2倍量的安替佛尼液，放置温箱1—2h后远心沉淀，用3%醋酸溶液中和沉淀物或用蒸馏水洗涤几次即可，处理后的痰液可作动物接种。

对开放性肠结核的细菌学诊断，一般可用乌兰浩特法。取被检动物的粪便30g加入安替佛尼液15mL和蒸馏水55mL，经2～3h后远心沉淀30min，倾去上层液体，于沉淀物中加lOmL点眼反应的判定标准。

阳性反应：有2个大米粒大或2×lOmm以上的呈黄白色的脓性分泌物自眼角流出，或散布在眼的周围，或积聚在结膜囊及眼角内；或上述反应较轻，但有明显的结膜充血、水肿、流泪并有全身反应者，判定为阳性反应。

疑似反应：有2个大米粒大或2×lOmm以上的灰白色、半透明的粘液性分泌物积聚在结膜囊内或眼角处，并无明显的眼睑水肿及其他全身症状者，判定为疑似反应。

阴性反应：无任何反应或仅有结膜轻微充血、流出透明浆液性分泌物者，判定为阴性反应。

对用老结核菌素皮内注射与点眼2种方法结合进行检疫的牛只在2种方法中的任何一种呈阳性反应者，即判定为结核菌素阳性反应牛。2种方法中任何一种方法为疑似反应者，判定为疑似反应。对疑似反应的牛，也应该单独隔离饲养，在30～45天后再作一次皮内注射和点眼试验，如果连续2次均为疑似反应时，判为阳性。

3静脉内注射结核菌素反应

静脉注射结核菌素除在一般牛群检疫外也可在曾经感染结核病的牛群中进行，会引起发热性全身反应，反应发生和经过比较迅速。当发生阳性反应时，体温从3～4h后开始上升，于第六小时增高1.5～3．O℃达到最高度，至第十二小时又降至常温，阳性反应伴有剧烈的机体反应和显著的灶性反应，本法特别适用于迅速找出患进行性结核病牛。

提纯结核菌素(PPD)的制造方法：将经过选择的牛型结核菌标准强毒株的菌膜，接种于普通培养基表面上(pH值为7.2)．培养2．O～2.5个月，待所有的培养物全部发育良好时，以高压蒸气消毒3h后滤过。滤液用三氯醋酸沉淀，将沉淀的蛋白用氢氧化钠溶解，再用pH值为7.2磷酸缓冲液稀释到原体积的4%。滤液用微量凯氏定氮法测定其每毫升的蛋白量，最后稀释为每毫升含Img结核蛋白(500001U)，此滤液即是提纯结核菌素(　PPD)。再经过无菌试验、安全试验、效力试验：①用致敏豚鼠测定国际单位(每毫升含2mg结核蛋白，10万IU)。②用结核牛进行效力试验；用健康牛做特异性试验，合格后分装即成。

提纯结核菌素(PPD)皮内试验，目前多数国家用颈部皮内注射方法（犊牛亦可注射肩胛部），每毫升含50000个IU的提纯结核菌素原液0.　ImL用注射用水或灭菌蒸馏水稀释的每毫升含25000个IU的提纯结核菌素0.2mL注射于牛颈侧中部的皮内。注射前用卡尺测量术部中央皮厚度，作好记录。注射后72h观察反应，观察时，以卡尺测量术部皮皱厚度（皮差）及术部肿胀面积的大小，并应仔细观察局部有无热、痛、肿胀等炎性反应，作好详细记录。

提纯结核菌素皮内反应判定标准：①阳性反应：皮差超过4mm或以上或皮差不到4mm，但局部呈弥漫性水肿者为阳性反应。②疑似反应：皮差在2.　1～3.　9mm，炎性水肿不明显者，为疑似反应。③阴性反应：皮差为≤2mm，无炎性水肿者，或仅有坚实冷硬小结、钮扣状肿者为阴性反应。