牛地方流行性白血病的临床症状与实验室检验

李传东1 秦尚生2

（1.黑龙江省海林农场畜牧科 黑龙江海林 157126，

2.黑龙江省牡丹江农垦圣澳良种奶牛有限责任公司 黑龙江海林 157126）

1 流行病学

牛地方流行性白血病的传染途径可分为2种，水平传播和垂直传播。水平传播是指通过污染牛乳汁、尿、粪、唾液和接种等直接传播。垂直传播即本病的发生有家族史，与遗传有关。据报道，易感牛的家族发病率可达30%~100%，公、母牛都可传染给后代。另外，感染的母牛在分娩时，可将病毒经子宫传给胎儿。多数病牛表现为隐性感染，仅在血液中可查到相应抗体，少数牛发生持续性淋巴细胞增生。本病的发生有2种类型，地方型和散发型。地方型，主要发生于3岁以上的牛，5~8岁的牛发病率最高。散发型，发生于不同年龄的牛。如发生于6月龄以内的犊牛和发生于1~2岁的青年牛，以胸腺瘤细胞浸润为主，称为胸腺型淋巴肉瘤等。

2 临床症状

本病有亚临诊型和临诊型2种表现。亚临诊型无瘤的形成，其特点是淋巴结细胞增生，无明显全身症状，产乳量有明显下降，可持续多年甚至终身，除个别牛可转变为临床型外，其他牛可持续多年甚至终生不恶化。临诊型多由亚临诊型转来，病牛生长缓慢，体重减轻，体温一般正常，有时略为升高。从体表或经直肠检查可触诊到病牛某些淋巴结呈一侧或对称性肿大，腮淋巴结或股前淋巴结常显著肿大，触摸时可移动。如病牛的一侧肩前淋巴结肿大，其头、颈可向对侧偏斜，眶后淋巴结肿大，可引起眼球突出。

3 病理变化

该病症的典型病理变化主要表现为消瘦贫血。牛体表淋巴结、骨盆和腹腔淋巴结肿大，切面外翻呈灰白色或淡黄色。组织学检查所有脏器都有肿瘤细胞浸润，肿瘤切片可见大量白细胞或成淋巴细胞（肿瘤细胞）浸润和成淋巴细胞核分裂现象。

4 实验室检验

牛地方流行性白血病检疫检验方法有血清学检查和琼脂扩散试验（www.nczfj.com）。因琼脂扩散试验方法简便、特异，而被广泛用于本病的检疫。准备的材料有pH值为7.2，0.05摩尔/升磷酸盐缓冲液的制备。甲液，十二水磷酸氢二钠17.9克，加蒸馏水至1 000毫升。乙液，一水磷酸二氢钠6.9克，加蒸馏水至1 000毫升。待甲液、乙液各自充分溶解后，分别于4℃中保存。使用时取甲液72毫升，乙液28毫升混合即成。

琼脂平板的制备。取琼脂1克，加入99毫升磷酸盐缓冲液，加入0.85克氯化钠水浴煮沸融化，加1%浓度的硫柳汞液1毫升。待冷却至50~60℃时，取琼脂液15~17毫升加入直径为90毫米的平皿中，制成2毫米厚的琼脂板。凝固后将平皿倒置，存放于4℃的冰箱中贮藏，可保存10天。

检验方法。用直径为5毫米的金属打孔器在琼脂板上打孔（www.nczfj.com），制成7孔1组的梅花圆形孔（中间1孔，外周6孔）。孔径5毫米，孔间距3毫米，用针头挑出孔中的琼脂。中心孔加抗原，外周第1、3、5孔加标准阳性血清，外周第2、4、6孔分别加被检血清，每孔以加满不溢出为度。平皿加盖后放在湿盒中，于室温中发生作用，分别于24、48小时观察并记录结果。

结果判定。标准阳性血清孔与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，本试验成立。若没有沉淀线或沉淀线不明显，试验则应重做。阳性反应是指被检血清孔与抗原孔之间出现一条清晰的沉淀线，并与标准阳性血清与抗原孔之间的沉淀线末端完全融合。少数被检血清在此沉淀线的外侧，还出现粗而直的第二条沉淀线。强阳性反应是指被检血清孔与抗原孔之间出现宽而模糊的沉淀线。应将被检血清作1~4倍稀释后重新试验，结果应出现清晰的沉淀线。弱阳性反应是指被检血清孔与抗原孔之间不出现沉淀线，但两侧的标准阳性血清的沉淀线的末端弯向被检血清孔。阴性反应，被检血清孔与抗原孔间不出现沉淀线。标准阳性血清孔与抗原孔之间的沉淀线末端向相邻被检血清孔偏弯。非特异性反应，被检血清孔与抗原孔之间虽形成沉淀线，但与标准阳性血清沉淀线的末端不相融合，这时该血清应判为阴性。

5 注意事项

被检血清应在4℃中保存，于15天内检查有效。试验时，在24小时内，抗原应与标准阳性血清之间出现清晰的沉淀线，与标准阴性血清之间不出现任何沉淀线。将本抗原用蒸馏水溶解，可恢复到原体积。