犊牛腹泻病中细菌的分离鉴定与药敏试验

犊牛腹泻是一种常见的犊牛病症、引起犊牛腹泻得病因有多方面，有管理因素（喂初乳过晚，喂犊牛的奶温过低，喂奶不经稀释直接喂牛犊，喂奶没有定量，环境以及气温突变）。根据对洛阳地区牛场的调查，在排除其它病因后，对腹泻犊牛进行细菌的分离与鉴定，并做了药敏试验，以便挑出敏感药物，进行针对性治疗。菌株分别取自白马寺、升升乳业、洛宁王村、偃师、伊川高山等地养殖场犊经过病原菌的分离鉴定，发现有一头牛是大肠杆菌和沙门氏菌的混合感染，其它七头为大肠杆菌感染，有两头为非细菌性感染。分析的原因有两点：一，由于养殖户的知识有限，他们不能科学合理的使用抗生素；二，由于细菌本身发生了变化，特别是它们能够获取其它耐药菌株的耐药基因。

一、大肠杆菌的生物学特性

大肠杆菌是肠杆菌科中一组革兰氏阴性，无芽胞，除少数例外为周身鞭毛，能运动，兼性厌氧，发酵葡萄糖，分解乳糖的细菌。本菌是一切温血动物肠道后段常在菌。肉食兽与杂食兽肠道中携带本菌的数量，远比草食动物多。部分菌株具有致病性和条件致病性，引起肠道疾病或肠道外感染。

大肠埃希氏菌大小为1.1-1.5×2.0-6.0，两端钝圆，有的近似球杆状，不行成芽孢，有鞭毛，运动或不运动，多数菌株有荚膜或微荚膜。一些菌株的菌体表面有一层具有黏附性的纤毛，黏附性纤毛是一种毒力因子。

1.犊牛腹泻病

近年来，随着奶牛业的快速发展，犊牛腹泻病已经成为关系到奶牛业兴衰的一种疾病，犊牛腹泻指的是正在吃奶的小牛出现腹泻的一种病症，一般在出生一个月内发病最高，多侵害出生后两周内的犊牛，一年四季均可发生，本病是造成犊牛生长发育不良和死亡的主要疾病之一，是新生犊牛的杀手，约占犊牛发病率的80% [1]。

2.犊牛腹泻病的危害

洛阳地区的牛厂为洛阳市民和周边人民提供优质的牛肉和牛奶，犊牛的健康率和成活率直接影响着人民的健康和农民的增收，这段时间犊牛的腹泻发生率明显上升，给养殖户带来了很大的经济损失，本文旨在确定发病原因，测定分离细菌对药物的敏感性，筛选出敏感的抗菌药物，从而为洛阳地区的犊牛腹泻病的有效防治提供科学的依据。

3.犊牛腹泻病的主要病因

目前知道引起腹泻的病因是多方面的，有管理因素（喂初乳过晚，喂犊牛的奶温过低，喂奶不经稀释直接喂牛犊，喂奶没有定量，环境以及气温突变）。有生物性因素（细菌性因素，包括大肠杆菌和沙门氏菌等等），寄生虫因素有绦虫、蛔虫、球虫；还有营养性因素，Va缺乏引起下痢。但是，总体来说在生物因素引起的犊牛腹泻在临床上占的比重相对较大。

二、临床表现

精神沉郁，食欲减退或废，全身被毛粗乱，腹部紧缩，尾根及后驱被粪便污染，排稀便。长期腹泻者，两侧肋部凹陷，极度消瘦，步态蹒跚，起立困难，脱水，粪便成水样，腥臭，有时附加黏液或血液。

三、诊断

诊断原则：根据流行病学，临床症状和剖检变化可做出初步判断；确诊需要实验室检查，用实验室病原检查方法，在排除其它病原感染（病毒、细菌、寄生虫等）经鉴定为致病性大肠杆菌，也可认为是原发性大肠杆菌，在其它原发性疾病中分离出大肠杆菌时，应视为继发性大肠杆菌。

四、预防

引起大肠杆菌的因素很多，比较复杂，大量临床资料表明：环境因素不良、饲养管理不善、混合感染是当前大肠杆菌病流行的重要因素，因此，需要采取综合性的措施。

五、治疗

大肠杆菌主要经消化道感染[www.nczfj.com]，而且耐药菌株广泛存在，所以针对性的选折一种吸收好，无耐药性的抗菌素是确保治疗效果的关键。目前较为简单和有效的药物筛选程序如下：从牛的粪便中分离致病大肠杆菌，进行增殖培养；选着多种吸收率高 的抗菌素制备药敏片；利用分离的大肠杆菌进行药敏试验，选出抗菌性最高的一种或多种药物，进行单个投药试验，确定最佳治疗药物和方案，选择合适的用药途径投药。药酶抑制剂是目前解决耐药性大肠感染的有效途径，在做积极的临床药物筛选的同时，适宜的选择含有药酶抑制剂产品可以发挥事半功倍的作用。[9]

六、结果与分析

1.病犊牛症状

精神委靡，食欲废绝，体温高达39. 5℃-40.5℃，全身被毛粗乱，腰拱起，走路摇摆，腹部紧缩，尿量减少，肛门外翻，周围粪便污染，排稀便，灰白色，腥臭。

2.致病性试验结果

把分离菌的肉汤培养物腹腔接种给小白鼠，分十组，每组两只小白鼠，接种A1A2C1的三组小鼠共6只，在24小时内死亡；接种B3aE1E2的三组小鼠共6只在72小时内死亡；接种D1D2的二组小鼠共4只，在72小时后死亡；接种B1B2的二组小鼠没有死亡。对照组小鼠则安全无恙。无菌采取病死小鼠的心、血、脾肝进行细菌分离鉴定，涂片、镜检，可见革兰氏阴性的杆菌。接种腹水的营养琼脂培养基上 ，生长的菌落形态基本符合大肠杆菌的形态特征。说明从腹泻犊牛的粪便中分离的大肠杆菌为致病性大肠杆菌。

3.药敏试验

将分离的大肠杆菌，经麦氏比浊法确定1毫升菌液中含有3亿个杆菌。取菌液0.3毫升（相当于一亿个杆菌）均匀涂布与平板上，用镊子将药敏片平放在平板上，并轻压，使其紧贴在平皿表面，37℃培养18小时，观察结果。

七、讨论

通过对不同地区采集的五个牛场的10头腹泻犊牛粪便进行细菌分鉴定，得到了十株疑似大肠杆菌和一株疑似沙门氏菌，经形态特征、染色特征、培养特征、生化鉴定等综合分析，确定分离菌株为大肠杆菌和沙门氏菌。致病性结果表明：强致病性大肠杆菌毒株有3株，中等毒力有3株，低致病性毒力菌株有2株，分别占分离菌株数的30%、30%和20%。另有两株为非致病性大肠杆菌，这两头牛也许是病毒感染或寄生虫等非细菌性感染，由于时间和目的的要求，没有做进一步的试验。